Оригинал здесь

От ученых ожидают одного — новых открытий. Им аплодируют, когда они совершают открытия, и их ругают, когда таковые им сделать не удается.

Однако ортодоксальные исследователи выглядят довольными, когда изучая связь между аутизмом и вакциной MMR (корь–свинка–краснуха), они ничего не находят. Они спешат опубликовать свои "открытия", а их начальники ликуют.

Когда эта история повторяется несколько раз, она укрепляет убежденность публики, что раз первоклассные ученые не могут найти связи между вакциной MMR, вирусом кори и регрессивным аутизмом, то таковой и в самом деле не существует.

В прошлом месяце большое беспокойство в Великобритании вызвали новые исследования, проведенные в Соединенных Штатах. Патологические находки в кишечнике у детей, больных регрессивным аутизмом, были идентичны тем, о которых сообщил д-р Эндрю Вейкфилд в 1998 г.

28-го мая Салли Бек опубликовала в еженедельнике "Мэйл он сандэй" статью под названием "Ученые боятся связи между вакциной MMR и аутизмом", посвященную исследованиям на медицинском факультете Университета Уэйк Форест в Северной Каролине.

В американском исследовании приняло участие 275 детей, больных регрессивным аутизмом и кишечными расстройствами. Из 82 полностью обследованных детей 70 имели положительный результат анализа на вирус кори. Бек цитирует д-ра Стивена Уолкера (Stephen Walker), главу исследовательской группы:

"Из того небольшого числа наблюдений, которые имеются пока что у нас, во всех случаях был обнаружен вакцинный штамм, а не дикий вирус". Это исследование доказывает, что существуют свидетельства наличия вируса кори в желудочно-кишечном тракте определенного количества детей с диагнозом регрессивного аутизма (1).

Несколько других воскресных изданий Великобритании информировали об этом, в то время как американские СМИ упомянули исследования в Уэйк Форест лишь вскользь.

Как по сигналу, 31 мая отдел новостей медицины информационного агентства "Рейтер" в Нью-Йорке опубликовал сообщение под заголовком "Нет доказательства присутствия вируса кори у детей, больных аутизмом и вакцинированных MMR" o другом исследовании. В статье говорилось:

Согласно сообщению в майском номере "Журнала медицинской вирусологии", генетический материал вируса кори, в противоположность некоторым ранним исследованиям, не был обнаружен в крови детей, больных аутизмом с регрессией в развитии, которым была сделана прививка вакциной MMR (2).

"Рейтер" продолжает:

В настоящем исследовании д-р М. А. Афзал (M. A. Afzal) из Национального Института биологических стандартов и контроля в Хартфордшире в Великобритании и его коллеги использовали несколько проб анализов с целью выявления последовательности генома вируса кори в препаратах лейкоцитов, взятых у 15 детей с аутизмом, которым была сделана прививка вакциной MMR в рамках календаря прививок Великобритании.

Согласно британским исследователям, не было найдено свидетельств фрагментов генома вируса кори у всех обследованных детей, несмотря на то, что методы исследования были "высокочувствительными, специфическими и трудоемкими", способными определить "РНК вируса кори вплоть до единичной копии за реакцию".

"Рейтер" заканчивает успокоительным:

Учитывая точность использованных методов, ученые считают, что материал вируса кори действительно не существует в образцах крови пациентов.

Двое друзей, один из Висконсина, другой из Калифорнии, оба достаточно осведомленные в проблеме связи вакцины и аутизма, написали мне почти одновременно, задавая один и тот же вопрос: "Может ли это быть на самом деле совпадением?" Как только публикуется статья в поддержку связи между аутизмом и вакциной MMR, почти мгновенно появляется другая, опровергающая ее?

Я ответил им, что не знаю наверняка, но что в прошлом "д-р М. А. Афзал из Национального Института биологических стандартов и контроля в Хартфордшире" опубликовал несколько статей, которые выглядели стратегически очень своевременными.

Различия между двумя исследованиями заслуживают быть отмеченными.

В исследовании в США геномная РНК вируса кори была действительно обнаружена в кишечнике 70 заболевших детей, а результаты исследования на наличие вируса у остальных 200 детей с типичной патологией кишечника еще ожидаются.

В исследовании в Британии ученые "не смогли определить" генетический материал вируса кори в крови 15 вакцинированных MMR детей, больных аутизмом.

Важно отметить, что вышеупомянутый М. А. Афзал вовсе не Н. А. Афзал (N. A. Afzal), педиатр-гастроэнтеролог, работающий в Центре педиатрической гастроэнтерологии в Королевском Свободном госпитале (The Royal Free Hospital) в Лондоне.

Речь идет о том самом госпитале, где Эндрю Вейкфилд долгие годы практиковал гастроэнтерологию и считался выдающимся специалистом до тех пор, пока он не позволил себе "раскачивать лодку", после чего был вынужден уволиться. В том же госпитале и на медицинском факультете Лондонского университета и колледжа профессором общей педиатрии работает Брент Тейлор (Brent Taylor), один из самых громких критиков Вейкфилда.

Н. А. Афзал вместе с группой исследователей Королевского госпиталя опубликовал свое первое исследование в декабре 2002 года. (3) Еще две его публикации увидели свет в 2004 г., а одна в 2005 году. (4) Абстракты ни одной из четырех статей не упоминают аутизм и вакцины.

С другой стороны, М. А. Афзал является сотрудником отделения вирусологии Национального Института биологических стандартов и контроля. Данный институт — всеми уважаемое многопрофильное научное учреждение национального и международного значения в стандартизации и контроле биологических веществ, включая вирусные и бактериальные вакцины. С 1976 года институт напрямую финансируeтся департаментами здравоохранения Великобритании (United Kingdom Health Departments).

Члены департаментов здравоохранения возглавили борьбу, направленную против Вейкфилда и его теории, и потратили огромную сумму денег на кампанию, призванную информировать публику о MMR. Элизабет Миллер (Elizabeth Miller), директор Департамента иммунизации Британского агентства по охране здоровья (U.K. Health Protection Agency's immunization department), была соавтором вместе с Тейлором в нескольких антивейкфилдских исследованиях.

Но вернемся к М. А. Афзалу из Института биологических стандартов, который, согласно заявлению агентства "Рейтер", в 2006 году был уверен, что материала вируса кори на самом деле не существует в образцах крови пациентов, потому что он, Афзал, и его сотрудники не нашли этого вируса. Он должен был знать, что группа японских исследователей из Токийского университета под руководством Х. Кавашимы (H. Kawashima) обнаружила тот же самый генетический материал в крови детей с аутизмом в 2000 году "Для того чтобы охарактеризовать вероятно присутствующий штамм, мы выполнили определение геномной РНК кори в периферических мононуклеарных клетках у восьми пациентов с болезнью Крона, троих — с язвенным колитом и у девятерых детей — с аутистическим энтероколитом".

Кавашима обнаружил, что "последовательности, полученные от детей с аутизмом, совпадают с вакцинными штаммами", и что эти результаты согласуются с историей болезни этих детей. Он опубликовал сообщение об этом (5).

Так как же получилось, что в 2000 году токийская группа обнаружила геномную РНК вакцинного штамма вируса кори в периферических мононуклеарных клетках вакцинированных детей с аутизмом, а группа из Великобритании в 2006 году не нашла ничего?

Ответ на этот ставящий в тупик и достаточно деликатный вопрос можно найти в весьма интересной публикации в номере "Журнала медицинской вирусологии" за май 2003 года, озаглавленной "Сравнительная оценка методов обратной совмещенной ПЦР (RT–PCR) для обнаружения вируса кори в совместных международных исследованиях", авторами которой являются Афзал и Кавашима при содействии таких известных экспертов как А. Д. Остерхауз (A. D. Osterhaus), С. Л. Косби (S. L. Cosby), Л. Джин (L. Jin), Дж. Билер (J. Beeler) и К. Такеучи (K. Takeuchi) (6).

Эта международная группа специалистов обнаружила, что

сравнение анализов, проведенных в различных местах, показывает, что точность исследования в различных лабораториях может отличаться в 1000 раз в определении последовательности вируса кори в клинических образцах. Это исследование показывает, что результаты ПЦР, положительные или отрицательные, вызывают сомнения, если они не подкреплены соответствующими данными, демонстрирующими абсолютную чувствительность применяемого метод. Специфический анализ на вирус кори, основанный на обратной совмещенный ПЦР, должен быть подтвержден стандартными препаратами вируса или образцами нуклеиновой кислоты. Крайне желательно установление корреляции между количественным методом ЦПР в режиме реального времени и общепринятым ПЦР для вируса кори.

Вашесказанное приводится просто ради интереса.

Совпадение за совпадением

Эндрю Вейкфилд опубликовал свою ставшую ныне широко известной статью "Лимфоидно-узловая гиперплазия подвздошной кишки, неспецифический колит и болезни развития у детей" в "Ланцете" 28 февраля 1998 года (7).

До того М. А. Афзал опубликовал всего 16 исследований и был главным автором 9 из них. 12 работ были посвящены свинке, а 4 — различным аспектам вирусологии. Афзал не написал ни единой статьи и не опубликовал ни одного исследования, касающегося кори, вакцины MMR, аутизма, воспалительных заболеваний кишечника или на родственные темы, до появления статьи Вейкфилда, ознаменовавшей собой важную веху.

Начиная с 28 февраля 1998 года, Афзал опубликовал 20 статей: 13 о кори, вакцине MMR и связанных с ними темах, 6 о свинке, 1 о других вирусах. В 13 из 20 статей он являлся главным автором.

Первая работа Афзала на тему кори "Отсутствие генома вируса кори при воспалительном заболевании кишечника" также была опубликована 28 февраля 1998 года в "Ланцете", через пять страниц после статьи Вейкфилда (8).

Краткое содержание статьи Афзала не было доступно для цитирования, но из заголовка очевидно, что вирусолог со своими коллегами из Национального Института биологических стандартов не обнаружили геном вируса кори у пациентов с воспалительным заболеванием кишечника.

Коревая инфекция и воспалительное заболевание кишечника

Летом 1998 года Балзола, Хан, Пера, Бонино, Паундер и Вейкфилд сообщили о наличии иммунореактивного IgM кори у пациентов с воспалительным заболеванием кишечника (ВЗК). Их исследования показали характерный меняющийся иммунный ответ на вирус кори у пациентов с болезнью Крона и язвенным колитом (9).

Афзал и соавт. опубликовали статью "Отсутствие определяемого генома вируса кори в тканях при ВЗК и в периферических лимфоцитах кори" в "Журнале медицинской вирусологии" (10). Согласно авторам, несмотря на использованные "высокочувствительные специфические для кори системы совмещенной обратной транскрипции ПЦР", им не удалось обнаружить вирус кори в исследованных 93 биоптатах толстой кишки и в 31 пробе лимфоцитов периферической крови, полученных у пациентов с ВЗК и от испытуемых без такого заболевания из контрольной группы.

Выглядит так, что М. А. Афзал искал свидетельства наличия вируса в толстой кишке и не нашел ничего. Вейкфилду немного позже повезло больше, когда он искал доказательства присутствия вируса в подвздошной кишке. Афзал без сомнения знал, что у детей, обследованных группой из Королевского Свободного госпиталя, была гиперплазия лимфоузлов подвздошной кишки.

В вирусологии, как и в жизни, всегда лучше смотреть в правильном направлении.

Тот факт, что Афзал не смог найти наличия геномной РНК вируса кори в периферической крови в 1998 г., не вызывает удивления. И восемь лет спустя, как было упомянуто выше, он все еще не может.

Вирус кори и болезнь Крона

В апреле 1999 года Вейкфилд, Монтгомери и Паундер опубликовали статью "Болезнь Крона: случай обнаружения вируса кори" (11). Они сообщали:

Мы предполагаем, как и другие, что вирус кори может быть иметь отношение к болезни Крона, и связанный с ним риск заключается в атипичном характере воздействия… Данные по болезни Крона означают, что вслед за начальным небольшим воздействием и низким уровнем иммуной толерантности следует персистирующая инфекция. Изменение характера воздействия вируса кори в этом веке будет связано со смещением в сторону низкой дозы инфекции. Такого рода воздействие также будет связано с персистенцией малого количества вирусов внутри отдельных очагов гранулематозного воспаления…

Афзал, Майнор, Армитейдж и Гош опубликовали статью "Вирус кори и болезнь Крона" в июне того же года (12). Абстракт публикации недоступен для изучения, но сходство двух заголовков просто ошеломляюще.

2000 г.: Обзор безопасности вакцины MMR

В аккуратной и скрупулезной, чисто научной статье о безопасности вакцины MMR "Вакцина от кори, свинки и краснухи: сквозь мутное стекло" (13) Вейкфилд и Монтгомери рассматривают тестирование на безопасность вакцины MMR или отсутствие такового.

В "Вопросах клинической безопасности вакцин от кори, свинки и краснухи" (14) Афзал, Майнор и Шилд не отвечают прямо на поставленный вопрос, но в сущности рассматривают все исследования, которые были проведены антивейкфилдским лагерем, в которых не удалось определить геномную РНК вируса кори у пациентов с ВЗК. В доступном абстракте статьи М. А. Афзал утверждает:

Основываясь на рассмотренных опубликованных данных, можно заключить, что нет прямой связи между вирусом кори или коревыми вакцинами и развитием болезни Крона. Это заключение подтверждается большинством эпидемиологических данных.

Приведенное выше утверждение, безусловно, не может быть корректным. С другой стороны, утверждение, что поскольку рассмотренные исследования не обнаружили связи между коревой вакциной и ВЗК, то этой связи не существует, выглядит в некоторой степени самонадеянным.

Что же касается безопасности вакцины MMR, следует упомянуть лишь одно заключение из недавнего исчерпывающего обзора по вакцине MMR в "Кокрейне" (Cochrane):

Дизайн и сообщения о результатах исследований безопасности вакцины MMR, как до–, так и постмаркетинговых, являются по большей части неадекватными.

Апрель 2002 г.

В статье "Возможный вирусный патогенетический механизм нового типа воспалительного заболевания кишечника" Ульман со своими коллегами, включая Вейкфилда, опубликовали результаты своих тщательнейших исследований. Они показали, что

у 75 из 91 пациента с гистологически подтвержденным диагнозом лимфонодулярной гиперплазии подвздошной кишки и энтероколитом был положительный анализ на вирус кори в тканях тонкой кишки по сравнению с 5 из 70 обследованных пациентов контрольной группы. Вирус кори был обнаружен в фолликулярных дендритных клетках и нескольких лимфоцитах в очагах реактивной фолликулярной гиперплазии. Количество репликаций вируса кори варьировалось от одной до 300 копий/нг общей РНК.

Авторы заключают:

Данные подтверждают связь между наличием вируса кори и кишечной патологией у детей с нарушениями развития (15).

М. А. Афзал и сотрудники не стали отвечать сразу же. Вместо этого они опубликовали две хорошо написанные, но чисто технические статьи о новейших очень точных исследованиях с помощью ПЦР. Публикация 2003 года обсуждалась выше (5). Вторая статья, опубликованная в "Журнале медицинской вирусологии" за май 2004 года, указана в списке литературы (16).

Ответ группы Афзала на сообщение Ульмана от 2002 года, похоже, является наиболее свежим опубликованным в "Журнале медицинской вирусологии" исследованием (май 2006 года). Он был опубликован агентством "Рейтер" и обсуждался выше (17).

Пробы лейкоцитов, взятые у детей с документированной прививкой вакциной MMR в анамнезе и подтвержденным диагнозом аутизма, были несколько раз исследованы для обнаружения множественных областей последовательности генома вируса кори. Ни одна проба анализов не дала положительный результат ни одним из методов. Применяемые трудоемкие высокочувствительные специфические анализы основывались на выявлении амплификации копий РНК вируса кори посредством количественной обратной совмещенной ПЦР (QRT–PCR) в режиме реального времени и при помощи обычной "вложенной" обратной совмещенной ПЦР (RT–PCR–nested PCR). Использовавшиеся анализы были способны выявить РНК вируса кори вплоть до единичной копии на реакцию. Количество экстракта нуклеиновой кислоты лейкоцитов, подвергнутого различным видам специфических исследований на вирус кори, было в несколько раз выше, чем минимально требуемое в образцах, где присутствие вируса кори было полностью доказано. Исследование не подтвердило сообщения о персистенции и вируса кори у больных аутизмом детей с регрессией в развитии.

И еще раз следует отметить, что М. А. Афзал со своими коллегами обследовали только 15 детей с аутизмом, которые "были вакцинированы вакциной MMR в рамках календаря прививок Великобритании". Если эти дети страдали от раннего аутизма и, как это ясно отмечено, просто "были вакцинированы MMR в рамках календаря прививок Великобритании", у них не обязательно будут типичные признаки аутического энтероколита.

Дети, которые приняли участие в исследованиях Вейкфилдом, страдают от регрессивного аутизма, совершенно иного заболевания; очевидная регрессия в развитии чаще всего выглядит хронологически связанной со сделанной детям прививкой вакциной MMR.

Заключение

Настоящий обзор не может установить, являлась ли недавняя публикации М. А. Афзала и сотрудников (17) ответом на исследование 2002 года проведенное Ульманом (15), или это была попытка опередить недавнее важное сообщение из Уэйк-Форестского университета.

С другой стороны, она действительно демонстрирует внезапный повышенный интерес (начиная с 1998 года) Афзала к геномной РНК вируса кори, вакцине MMR, аутизму и ВЗК.

В то время как дальнейшие исследования, подтверждая и удостоверяя находки Вейкфилда, публикуются в США и за их пределами, неудивительно, что М. А. Афзал со своими соратниками продолжает проводить свои изощренные исследования и по сей день не находит ничего.

Дальнейшие публикации этой группы будут приветствоваться прививочными властями и медиками до тех пор, пока те будут сообщать о новых отрицательных результатах.

Медицинские власти несомненно будут заявлять, что раз уж Афзал с друзьями не нашли ничего, то и на самом деле не было ничего, и следовательно, вирус кори и вакцина MMR не несут никакой ответственности за внезапный регресс в развитии у малого процента детей, кто генетически предрасположен к аутизму.

И это будет на самом деле трагично.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Sally Beck. "Scientists fear MMR link to autism." Mail on Sunday. May 28, 2006. Available at http://tinyurl.com/zjbsa
2. "No Evidence of Measles Virus in MMR-Vaccinated Autistic Children." Reuters Health Report, New York. June 30, 2006. Available at http://www.medscape.com/viewarticle/533545
3. Afzal NA, Addai S, Fagbemi A, Murch S, Thomson M, Heuschkel R Refeeding syndrome with enteral nutrition in children: a case report, literature review and clinical guidelines. Clin Nutr. 2002 Dec; 21(6):515–20. PMID: 12468372
4. Afzal NA, Davies S, Paintin M, Arnaud-Battandier F, Walker-Smith JA, Murch S, Heuschkel R, Fell J. Colonic Crohn's disease in children does not respond well to treatment with enteral nutrition if the ileum is not involved. Dig Dis Sci. 2005 Aug; 50(8):1471–5. PMID:16110838
5. Kawashima H, Mori T, Kashiwagi Y, Takekuma K, Hoshika A, Wakefield A. Detection and sequencing of measles virus from peripheral mononuclear cells from patients with inflammatory bowel disease and autism. Dig Dis Sci. 2000 Apr; 45(4):723–9.
6. Afzal MA, Osterhaus AD, Cosby SL, Jin L, Beeler J, Takeuchi K, Kawashima H. Comparative evaluation of measles virus-specific RT-PCR methods through an international collaborative study. J Med Virol. 2003 May; 70(1):171–6. PMID: 12629660
7. Wakefield AJ, Murch SH, Anthony A, Linnell J, Casson DM, Malik M, Berelowitz M, Dhillon AP, Thomson MA, Harvey P, Valentine A, Davies SE, Walker-Smith JA. Ileal-lymphoid-nodular hyperplasia, non-specific colitis, and pervasive developmental disorder in children. Lancet. 1998 Feb 28; 351(9103):637–41
8. Afzal MA, Minor PD, Begley J, Bentley ML, Armitage E, Ghosh S, Ferguson A. Absence of measles-virus genome in inflammatory bowel disease. Lancet. 1998 Feb 28; 351(9103):646–7. PMID: 9500326
9. Balzola FA, Khan K, Pera A, Bonino F, Pounder RE, Wakefield AJ. Measles IgM immunoreactivity in patients with inflammatory bowel disease. Ital J Gastroenterol Hepatol. 1998 Aug; 30(4): 378–82. PMID: 9789132
10. Afzal MA, Armitage E, Begley J, Bentley ML, Minor PD, Ghosh S, Ferguson A. Absence of detectable measles virus genome sequence in inflammatory bowel disease tissues and peripheral blood lymphocytes. J Med Virol. 1998 Jul; 55(3):243–9.
11. Wakefield AJ, Montgomery SM, Pounder RE. Crohn's disease: the case for measles virus. Ital J Gastroenterol Hepatol. 1999 Apr; 31(3):247–54. Review. PMID:10379489
12. Afzal MA, Minor PD, Armitage E, Ghosh S. Measles virus and Crohn's disease. Gut. 1999 Jun; 44(6): 896–7. PMID:10375297
13. Wakefield AJ, Montgomery SM. Measles, mumps, rubella vaccine: through a glass, darkly. Adverse Drug React Toxicol Rev. 2000 Dec; 19(4): 265–83; discussion 284–92. Review. PMID:11212459
14. Afzal MA, Minor PD, Schild GC. Clinical safety issues of measles, mumps and rubella vaccines. Bull World Health Organ. 2000; 78(2): 199-204. Review. PMID:10743285
15. Uhlmann V, Martin CM, Sheils O, Pilkington L, Silva I, Killalea A, Murch SB, Walker-Smith J, Thomson M, Wakefield AJ, O'Leary JJ. Potential viral pathogenic mechanism for new variant inflammatory bowel disease. Mol Pathol. 2002 Apr; 55(2): 84–90. PMID: 11950955
16. Ozoemena LC, Minor PD, Afzal MA. Comparative evaluation of measles virus specific TaqMan PCR and conventional PCR using synthetic and natural RNA templates. J Med Virol. 2004 May; 73(1):79–84. PMID: 15042652
17. Afzal MA, Ozoemena LC, O'Hare A, Kidger KA, Bentley ML, Minor PD. Absence of detectable measles virus genome sequence in blood of autistic children who have had their MMR vaccination during the routine childhood immunization schedule of U.K. J Med Virol. 2006 May; 78(5): 623–30. PMID:16555271